Influence of contaminated fodder on the emergence and spread of infectious diseases of bee brood in Tajikistan

В современных условиях интенсификации сельскохозяйственного производства пчеловодство приобретает большое значение в повышении урожайности плодово-ягодных, овощных, кормовых, технических и других сельскохозяйственных культур. В каждом хозяйстве, возделывающем поля и сельхозугодия, при наличии пчел дополнительно получают хороший урожай, а от самих пчел – ценные продукты, обладающие биологически важным составом.

С учетом вышесказанного инфекционные болезни медоносных пчёл в республике Таджикистан характеризуются высокой контагиозностью и способны быстро распространяться как в пределах одной пасеки, так и на пасеках, удалённых на большие расстояния. Огромную роль при возникновении особо опасных болезней расплода медоносных пчёл играют бактерии и микроскопические грибы, вызывающие микозы – аскосфероз, аспергиллёз, меланоз и др.

Изучение развития эпизоотического процесса при микозах пчёл показало, что большое значение имеет концентрация спор данных возбудителей в кормах. Сотовый мед и пергу,  являющихся основными факторами передачи возбудителя инфекционных болезней, исследовали для установления степени обсеменённости микроорганизмами, патогенными для расплода пчёл.

Учитывая необходимость изучения и подтверждения этиологической роли микозов медоносных пчёл в возникновении смешанных инфекций, нами были проведены эпизоотологические исследования на пасеках, а так же микробиологические исследования патологического материала в лабораторных условиях, согласно утвержденным методикам.

При проведении эпизоотологических исследований на пасеках и проверке состояния пчелиных семей,  целью, выявления признаков гибели пчёл и расплода, производился сбор патологического материала для дальнейших лабораторных анализов. Были отобраны соты с печатным и открытым расплодом, содержащие погибших или даже мумифицированных личинок, а также соты с мёдом и пергой, а также трупами пчёл на дне улья. Также собирались эпизоотологические данные, такие как время появления клинических симптомов заболевания, условия возникновения этих симптомов, количество больных пчелиных семей и характерные клинические признаки. Учитывались также использованные противогрибковые средства на пасеке, проведенные дезинфекции, профилактические меры в предыдущие и текущие сезоны. После сбора образцов они проходили соответствующее лабораторное исследование согласно определенной схеме.

Отобранные образцы проходили следующие этапы исследования согласно разработанной методике:

1. Производился визуальный осмотр материала.

2. После этого материал подвергался приготовлению препаратов и последующей микроскопии.

3. Для выделения возбудителя проводилась подготовка материала:

- готовили диагностические смывы грибного налета с погибших пчел и пораженных личинок, а также разрезали трупы пчел для анализа кишечника;

- проводились микологические исследования, включая посев патологического материала на питательные среды для выделения чистых культур грибов рода Aspergillus flaus и Ascosphaera apis;

- далее изучались культурально-морфологические свойства выделенных культур возбудителей.

Процесс приготовления препаратов и посев на питательные среды осуществлялся в соответствии с «Методическим указаниям по лабораторной диагностике аспергиллёза пчёл», (утверждённым ГУВ МСХ СССР, 10.05.1984) и «Методическим указаниям по лабораторной диагностике аскосфероза пчёл и выделению возбудителя из пыльцы (перги)», (утверждённым ГУВ Госагропрома СССР 09.04.1986).

Всего за период исследований было проведено 1433 лабораторных анализа, связанных с диагностикой и идентификацией возбудителей микозов пчел.

При проведении бактериологических исследований в лабораторных условиях использовали рекомендованные для выделения возбудителя микозов готовые  питательные среды – агар Сабуро и бульон Чапека.

Методом температурного стресса определяли носительство спор возбудителей инфекционных болезней в организме личинок пчёл 2-3-дневного возраста. Метод заключается в том, что участок сота с клинически здоровым расплодом рабочих пчёл или трутней в 2-3-суточном возрасте (открытые личинки) выдерживается при температуре +5+80С, в течение 12-18 часов. Затем образцы расплода выдерживаются при комнатной температуре 48-72 часа. Из потемневших погибших личинок пчёл готовят смывы и проводят дифференциальную диагностику.

Исследования были проведены в лаборатории болезней птиц, пчел и рыб Института Ветеринарной Медицины ТАСХН.

Изучение причин развития микозов расплода пчёл, показало, что выделенные из патологического материала возбудители относятся к разным видам микроорганизмов.

При выделении патогенных микроорганизмов из патологического материала (останки погибших личинок, высохшие и мумифицированные личинки, свежепогибшие пчёлы, подмор), сотовый мёд, перга, наибольшее количество приходилось на культуры A. apis и Asp. flaus.

Клинические признаки заболеваний при смешанной форме микозов не имели яркого специфического проявления, чётко были выражены лишь характерные признаки (мумификация погибших личинок), что затрудняло постановку диагноза на аспергиллёз и аскосфероз.

За протяжение 8 лет нами было проведено исследование 1433 проб для определения видового состава возбудителей микозов, выделенных при проведении дифференциальной диагностики болезней расплода медоносных пчёл, из них 245 проб было положительным, что составила 17,1%, остальные пробы (1188) были отрицательными. Виды возбудителей представлены в рисунке 1.

Рисунок 1 - Результаты лабораторных исследований

DOI:10.60797/JAE.2024.52.4.1

Как показывают  данные рисунка 1,  из 1433 проб исследованных,  аскосфероз составляет 7,32%, аспергиллез – 1,46%, американского гнильца – 3,48% и европейского гнильца составляло 4,81%.

Результаты лабораторных исследований видового состава возбудителей инфекционных заболеваний по годам представлены в таблице 1.

Как показывают результаты данной таблицы, наряду с возбудителем аскосфероза пчёл в 2018-2019 годы составляло 12,4-2,8% соответственно. Кроме этого, из исследованного патологического материала в эти же годы выделили значительное количество культур возбудителя американского гнильца и европейского гнильца, в среднем 6,8% и 7,9% соответственно. Количество культур других видов возбудителей инфекционных болезней было значительно меньше.

Разнообразие видового состава возбудителей инфекционных болезней,  поражавших расплод пчёл в одни и те же возрастные сроки (2-6 дней) способствовало тому, что клинические признаки, указанных инфекционных болезней имели атипичный характер (высыхания, мумификации личинок и др. не отмечалось).

По результатам, полученным при проведении исследований 2450 пчелиных семей из 80 пасек, а также по анамнестическим и эпизоотологическим данным, полученным от пчеловодов и специалистов можно сделать вывод, что возникновение и развитие микозов в среднем составляло от 1,5-7,4% случаев.

Расчет индекса эпизоотичности аскосфероза и аспергиллёза, имевших место на обследованных пасеках за период  наблюдения, строился на результатах проведения эпизоотологического анализа отдельных пчеловодческих хозяйств различных районов Хатлонской области за определённый отрезок времени (2016-2023гг.).

Во всех случаях индекс эпизоотичности аскосфероза и аспергиллёза был выше, чем при других инфекционных заболеваниях независимо от формы их проявления. Результаты эпизоотологического анализа данных, полученных лабораторией по изучению болезней птиц, пчёл и рыб ИТВ ТАСХН за различные периоды наблюдений в пчеловодческих хозяйствах отдельных районов Хатлонской области, представлены в таблице 2.

Полученные данные при эпизоотологических обследованиях хозяйств указывали на то, что микозы пчёл регистрировались на пасеках раньше, чем другие болезни. Совпадение индексов эпизоотичности аскосфероза и аспергиллёза пчёл было связано с одновременным проявлением данных инфекционных заболеваний на обследованных пасеках, что было подтверждено лабораторными исследованиями патологического материала.

Таким образом, аскосфероз и аспергиллёз, при сравнении сроков распространения других видов инфекционных болезней пчёл, имеют более длительный период распространения. Разница величин индекса эпизоотичности грибковых болезней пчёл дает основание считать эти заболевания основными, на фоне которых возникали и развивались другие виды инфекционных болезней расплода пчел (европейский и американский гнильцы, и т.д.).

Для определения первичного значения возбудителей микозов в этиологии смешанной формы инфекционных болезней в дальнейших лабораторных исследованиях использовали фактор температурного стресса на клинически здоровый расплод из пчелиных семей больных и условно здоровых, там, где обнаруживали контаминацию корма возбудителями микозов.

При воздействии температурного стресса на клинически здоровых 2-5-дневных личинок пчёл, обнаруживались погибшие имевшие характерные клинические признаки гибели от инфекционного заболевания (изменение структуры тело личинок с последующим мумификацием). Из погибших и мумифицированных личинок готовили диагностический смыв, для проведения лабораторных исследований. В результате были выделены культуры возбудителей инфекционных болезней (табл. 3).

Данный метод исследования, показал, что в организме 2-5-дневных личинок пчёл преобладает носительство спор возбудителей микозов, которые заносятся в ячейку с инфицированным кормом, что являются первичной инфекцией при смешанной форме проявления инфекционных болезней.

Из данных таблицы видно, что в большинстве случаев в больных и условно здоровых пчелиных семьях из организма клинически здоровых личинок выделяли культуры возбудителей микозов. При этом корма этих семей, по результатам выделения культур, были заражены возбудителями гнильцовых болезней. Контаминация сотового меда в больных микозом пчелиных семьях спорами грибов была очень высокая и достигала в отдельных случаях 100%, однако клиническое проявление других инфекционных заболеваний отмечали не всегда.

Данные, полученные в результате проведённых эпизоотологических и лабораторных исследований на пасеках отдельных районов Хатлонской области, показали, что аскосфероз и аспергиллёз пчёл в исследуемых патологических материалов большей части были заражены возбудителями микозов которые являлись в большинстве случаев первичной инфекцией на фоне, которой возникали и развивались другие инфекционные болезни (табл. 1, 2).

Развитию микозов пчёл способствовала высокая степень носительства спор A. apis и Aspergillus flavus в организме клинически здоровых личинок, что было выявлено методом провокации (температурного стресса). Одновременно с установленным фактом была выявлена контаминация корма возбудителями гнильцовых болезней. Степень контаминации мёда спорами инфекционных болезней, которые заносятся пчелами из вне способствовала развитию аскосфероза и аспергиллёза, что подтверждают расчёты индекса эпизоотичности указанных инфекционных болезней.

В результате проведённых эпизоотологических и лабораторных исследований 1433 проб патологического материала которые были взяты из 80 пасеках было обнаружено 245 проб положительным на инфекционные заболевания. Из исследованных проб было выявлено аскосфероза пчёл в 2018-2019 годы 12,4-2,8% соответственно. Наряду с этим в эти же годы также был определен видовой состав возбудителей микозов при смешанных инфекционных болезнях пчел, выделили значительное количество культур возбудителя американского гнильца и европейского гнильца, в среднем 6,8% и 7,9% соответственно.

В ходе проведенных лабораторных исследований была определена контаминация корма спорами возбудителей инфекционных болезней в частности аскосфероза и аспергиллеза 11-18 случаев.

Таким образом, контаминированный спорами инфекционных болезней корм является основным источником, влияющим на распространение и развитие инфекционных болезней в пчелиных семьях.